Hemoglobin og -derivater i spinalvæske (Xantokromi)

Xantokromi, Spektrofotometri av spinalvæske

Feil tidspunkt for prøvetaking eller feil behandling av spinalvæsken vil medføre høy risiko for falskt negativt resultat.

Spektrofotometri av spinalvæske er indisert i de tilfellene subaraknoidalblødning (SAH) eller annen intrakraniell blødning til spinalvæsken er mistenkt uten at blødning er påvist ved CT. Det er svært viktig ikke å overse en liten blødning, fordi den i 10-40% av tilfellene etterfølges av en kraftigere SAH med betydelig risiko for alvorlig varig skade eller død.

Bestilles fortrinnsvis elektronisk.

Informasjon om symptomdebut må oppgis.

Ved behov for papirrekvisisjon, se Bestilling av analyser og rekvisisjoner, Medisinsk biokjemi.

For eksterne rekvirenter: Oppgi også tidspunkt for sentrifugering og avpipettering, og målte verdier for P-Bilirubin og P-Protein. 

Spinalvæske.

LiHep-plasma eller Serum for supplerende analyse av P-Bilirubin og P-Protein er ønskelig for tolkning ved forhøyede verdier (alternativ oppgi disse verdiene på rekvisisjon).

Feil tidspunkt for prøvetaking eller feilbehandling av spinalvæsken vil medføre høy risiko for falskt negativt resultat.
Korrekt prøvebehandling er svært viktig for korrekt analyseresultat.

Les derfor dette punktet NØYE før prøvetaking.

Pasientforbedelse 

Spinalpunksjon skal skje tidligst 12 timer etter symptomdebut. Planlegg også blodprøvetaking for måling av P-Bilirubin og P-Protein i samme tidsrom.

Prøvetaking og prøvebehandling

                 1 mL spinalvæske.

Prøven til spektrofotometri må alltid være den siste fraksjon av tappet spinalvæske. Ved tapping av flere prøverør, skal det siste tappede røret benyttes til spektrofotometri. Årsaken er at dette reduserer faren for tilblanding med erytrocytter ved en eventuell innstikksblødning. 

Spinalvæsken må lysbeskyttes hele tiden fra prøvetaking til analysering, f.eks ved hjelp av aluminiumsfolie. 

For eksterne rekvirenter: Tilsendte spinalvæskeprøver må umiddelbart og senest innen 30 minutter etter spinalpunksjon sentrifugeres og avpipetteres til nytt rør. Følgende informasjon må oppgis på rekvisisjon:

• Tidspunkt for sentrifugering og avpipettering. · 
• Spinalvæskens utseende før og etter sentrifugering. 

Spinalvæsken må lysbeskyttes og leveres laboratoriet umiddelbart og innen 30 minutter. Rørpost skal ikke benyttes. 

For eksterne rekvirenter: Den ferdig sentrifugerte og avpippeterte spinalvæsken må lysbeskyttes og oppbevares kjølig. Holdbarhet for avpippetert spinalvæske er 4 døgn når lysbeskyttet og oppbevart kjølig.

Avdeling for medisinsk biokjemi, Ullevål.

Analysen utføres på hverdager kl. 8 til 14, prøven må være mottatt senest kl. 13 for besvaring samme dag.

Spektrofotometrisk måling av spinalvæsken i bølgelengdeområdet 360 – 600 nm. Absorpsjonen måles i AU (Absorbance Units; absorbansenheter).

• Bilirubin kvantiteres ved 476 nm
• Oksyhemoglobin måles 415 nm

Resultatet utgis som tekstet svar.

I tidsrommet ½ - 12 timer etter en intrakraniell blødning vil erytrocyttene begynne å lysere og frigi oksyhemoglobin til spinalvæsken. Dette påvises som en skarp absorpsjonstopp rundt 415 nm ved spektrofotometri av spinalvæsken. Maksimalverdien sees 1-2 døgn etter gjennomgått blødning, men toppen forsvinner i løpet av dager (under en uke). Etter 9-15 timer kan man også begynne å påvise tilstedeværelse av bilirubin som en bred topp rundt 455 nm eller som en ”skulder” til en eventuell oksyhemoglobintopp. Ved å analysere absorbansen ved 476 nm for å bestemme bilirubin, unngår man at absorbansen fra evt. tilstedeværende oksyhemoglobin medbestemmes. Bilirubinet dannes in vivo ved at hemoglobinet blir nedbrutt av hemoksygenase i makrofager og celler i hjernehinnene. Dette er årsaken til at man må vente minst 12 timer fra symptomdebut til prøvetaking for å kunne påvise bilirubin som tegn på blødning. Bilirubinnivået når maksimum om lag 2-3 døgn etter blødningen og er ofte påviselig i 2-3 uker.

Svar på analysen utgis som kommentar. Kommentartekst er avhengig av at laboratoriet har mottatt korrekt informasjon om prøvetakingstidspunkt og prøvebehandling. 

Beregnet bilirubinabsorbans er beste mål på sannsynlighet for gjennomgått intrakraniell blødning. "Beregnet" vil si at det tas hensyn til bakgrunnsstøy ved absorbansmålingen, høye verdier av protein i spinalvæske og høye verdier av bilirubin i plasma som lekker over til spinalvæsken.

Beregnet bilirubinabsorbans > 0,007 AU (ved 476 nm) er forenelig med gjennomgått intrakraniell blødning.  Med mindre det er sterke holdepunkter mot at det kan foreligge en gjennomgått intrakraniell blødning, bør alle disse pasientene behandles som om det er subaraknoidalblødning, siden risikoen for en blødning med katastrofale konsekvenser er betydelig.

Beregnet bilirubinabsorbans ≤ 0,007 AU taler mot gjennomgått intrakraniell blødning (gitt at det har gått >12 timer mellom symptomdebut og prøvetaking, og prøven har vært lysbeskyttet). Lav oksyhemoglobinabsorbans taler mot en subaraknoidalblødning de siste døgn forut for spinalpunksjonen (med mindre blødningen har funnet sted de aller siste timene før spinalpunksjonen)

For utfyllende informasjon om laboratoriets rutiner for vurdering, se vedlagt skriv  Spektrofotometri av spinalvæske til påvisning av intrakraniell blødning.pdf

Bilirubin < 0,007 AU ("Korrigert bilirubinabsorbans")

Oksyhemoglobin < 0,020 AU

Analytisk og biologisk variasjon er ikke godt definert/bestemt. Både nivået av oksyhemoglobin og bilirubin er definert av absorbansen ved bestemte bølgelengder. Det er også andre stoffer/bestanddeler som kan påvirke absorbansen ved de aktuelle bølgelengdene. Nivået av protein i spinalvæsken, samt bilirubin i blodet som kan lekke over i spinalvæsken, vil påvirke absorbansen. Tid fra blødning fant sted til tidspunktet prøven ble tatt vil i vesentlig grad påvirke resultatet. Oksyhemoglobin stiger raskt (fra minutter/få timer) og faller raskt (få dager). Bilirubin stiger langsommere (fra noen få timer) og faller langsomt (uker).

Basert på studier og erfaringer fra store laboratoriesentra er det laget internasjonale konsensus-anbefalinger som angir en grenseverdi for korrigert bilirubinabsorbans på 0,007 absorbansenheter (AU). Sannsynligheten for at det har forekommet en subaraknoidalblødning er (svært) lav ved bilirubinabsorbans < 0,007 AU (ved 476 nm) forutsatt korrekt prøvetaking (minst 12 timer etter symptomdebut) og prøvebehandling (lysbeskyttet).