Fluorescence In Situ Hybridisering (FISH)

Til bruk av diagnostisk klassifisering av pasienter med lymfoide maligniteter. Translokasjon av MYC, BCL2 og BCL6 gener kan brukes til å skille mellom lymfomentitetene: «Burkitt lymfom»; «Diffust storcellet B-celle lymfom/høygradig B-celle lymfom med MYC og BCL2 genrearrangeringer»; «diffust storcellet B-cellelymfom, UNS» og «høygradig B-cellelymfom, UNS». Påvisning av BCL2-IGH rearrangering kan bidra til diagnostisering av follikulært lymfom hvor enten morfologi eller immunofenotype er uvanlig. Analysen anvendes etter retningslinjer fra nasjonalt handlingsprogram for diagnostikk, behandling og oppfølging av pasienter med maligne blodsykdommer (1, 2).

· Formalinfiksert, parafininnstøpt (FFPE) vev: parafinblokk og/eller 3 ufargede snitt (2-3 µm tykkelse, antall snitt avhenger av antall prober som ønskes å undersøkes) montert på Superfrost Plus objektglass eller tilsvarende type objektglass.

· 1 HPS-farget/HE-farget snitt (2-3 µm tykkelse) skjært som siste snitt, dvs. rett etter de ufargede snittene til FISH analysen.

Oppbevaring og forsendelse

Parafinblokker og snitt kan sendes med vanlig post.

Patolog rekvirerer analysen når de ser det er klinisk indikasjon for dette. 

Fluorescence In Situ Hybridisering (FISH) er en molekylær cytogenetisk analyse som bruker fluorescensprober til å lokalisere og påvise endringer i arvematerialet (DNA), og da spesielt forandringer i kromosomet knyttet til kreft (3). Fluorescensprober er korte sekvenser med nukleinsyrer (i diagnostikken som regel kommersielt produsert), merket med et fargestoff som kan detekteres under visse bølgelengder i et fluorescensmikroskop. Denne proben er tilsvarende (komplementær) med et spesifikt område av kromosomet, for eksempel i MYC genet, og vil under de rette betingelsene feste seg til dette området gjennom hybridisering. Slik kan genetiske endringer visualiseres på slides av vevssnitt og ses i morfologisk kontekst.

Patologiavdelingen har validert FISH for translokasjoner, og bruker probene c-MYC, BCL2, BCL6 og BCL2-IGH. IGH-MYC tilbys ikke lenger, men sendes til Radiumhospitalet ved behov. Translokasjoner: en del av et kromosom har byttet plass med en del av et annet kromosom.

Svar

• Resultatene tolkes basert på fargesignalratio og/eller fargesignalkonfigurasjon. Resultatene oppgis som enten påvist genrearrangering eller ikke påvist genrearrangering.
• Patologer i samarbeid med bioingeniører tolker funnene og besvarer resultatene i tekstformat.

Svartid

Forventet svartid vil være ca. 3-5 arbeidsdager.

• Frosne prøver og parafinsnitt som ikke er montert på et Superfrost Plus-objektglass kan ikke benyttes.
• Om prøven har overveiende dårlig morfologi, som nekrotisk eller klemt vev, eller om prøven ikke inneholder nok vitale, vurderbare tumorceller (minst 100), blir FISH-farging ikke utført. Om dette er tilfellet, legger ansvarlig patolog ved kommentar i LVMS.
• Vårt laboratorium anser en rearrangering som påvist dersom ≥15 % av de analyserte kjernene viser splittede signaler (ett grønt, ett rødt og ett fusjonssignal). Denne cut-offen tar hensyn til teknisk variasjon og bakgrunnsignal fra normale celler, og er basert på interne kvalitetskontroller og probe-ytelse. Det er vanlig at ulike laboratorier benytter litt forskjellige terskelverdier (eks. 5-15%)(4).