Klonalitetsanalyser av B-lymfocytter/T-lymfocytter

ANALYSEN UTFØRES VED

Akershus universitetssykehus (Ahus)

Avdeling for Patologi, Seksjon for molekylærpatologi og forskningsstøtte

Telefon 679 62986

Sykehusveien 25, 1478 Nordbyhagen

Analyser bestilles ved mistanke om lymfoproliferativ sykdom. Lymfom diagnostikk baseres på kliniske opplysninger, morfologi, immunhistokjemi og/eller fluorescens in situ hybridisering (FISH). Morfologiske- og immunhistokjemiske funn sammenlignes ofte med funn fra flowcytometrisk immunfenotyping av lymfoide celler. I visse tilfeller er det vanskelig å avgjøre om det er neoplastisk eller reaktiv tilstand. Påvisning av immunglobulin genrearrangeringer og/eller T-celle reseptor genrearrangeringer fra samme celleklon kan bidra til å skille neoplastiske tilstander fra reaktive tilstander. For de fleste neoplastiske tilstander vil det kunne påvise (mono)klonale genrearrangeringer, ettersom de neoplastiske cellene tilhører samme celleklon mens ved reaktive tilstander vil det kunne påvise polyklonale genrearrangeringer.

Analysen rekvireres i LabVantage Medical Suite (LVMS) som er laboratorieinformasjonssystem til patologi avdeling på Akershus universitetssykehus. Analysen bestilles av patolog.

For rekvirenter utenfor patologi avdelingen, kan analysen bestilles på Papirrekvisisjon.

Sett kryss på ønsket analyse(r):

· B-celle klonalitet

· T-celle klonalitet

Formalin Fiksert Parafininnstøpt (FFPE) snitt-ruller i eppendorf rør.

Antall FFPE-snitt varierer fra 4 – 10 snitt med tykkelse på 10 µm. Antall snitt vurderes etter vevsareal. DNA blir ekstrahert fra FFPE-snittene og ideelt DNA konsentrasjon er ca. 100 ng/µl, målt med NanoDrop spektrofotometer.

1. Steg: Manuelt DNA ekstraksjon med filter kolonne.
2. Steg: Multipleks-PCR for IGH og IGK (gener til B-lymfocytter) og/eller TCRB og TCRG (gener til T-lymfocytter).
3. Steg: Kapillær elektroforese av PCR-produkt (kapillær fragmentanalyse).
4. Steg: Vurdering av de detekterte DNA-fragmentlengdene fra kapillær elektroforesen med analyseprogram GeneMapper.

Resultatsbeskrivelser følges Euroclonality/ BIOMED-2 guidelines for interpretation and reporting of Ig/TCR clonality testing in suspected lymphoproliferations (AW Langerak et al.).

Hver analyse dvs. IGH-, IGK-, TCRB- og TCRG genrearrangering vil få hver sin egen resultatbeskrivelse. Resultatbeskrivelse kan ha følgende tekst:

• Polyklonal rearrangering.
• Klonal topp(er) detektert.
• Klonal topp(er) på polyklonal bakgrunn detektert.
• Oligoklonal rearrangering.
• Mulige topp(er) på polyklonal bakgrunn.
• Intet rearrangert produkt påvist.
• Intet produkt/ikke evaluerbar, dårlig DNA-kvalitet.
• Ikke utført, se kommentar.

Patolog sammenfatter klonalitetsresultater i sammenheng med tilgjengelige kliniske, morfologiske og immunfenotypiske opplysninger. Det er derfor viktig å se det sammenfattet resultatet under diagnose fra patologen.

Forventet svartid er 5-10 virkedager fra patologen bestiller analysen.

MÅLEUSIKKERHET

Klonalitetanalyse er en kvalitativ analyse som det ikke vil være relevant å tallfeste måleusikkerheten. Måleusikkerheten vil da være analytiske og biologiske faktorer som kan bidra til variasjon i prøvesvar.

FEILKILDER/METODENS BEGRENSNINGER

Ved vurdering av både fragmenter/topper og ikke topper, kan det være mange «fallgruver». Disse «fallgruvene» kan være av både tekniske og biologiske natur som man må kjenne til for å unngå en mulig feiltolkning av topper/ikke topper. Artikkelen Euroclonality/ BIOMED-2 guidelines for interpretation and reporting of Ig/TCR clonality testing in suspected lymphoproliferations (AW Langerak et al.), tabell 2, er ført opp ulike faktorer man må tenke på under vurdering av fragmenter/topper eller ikke topper.