APOE genotyping

DNA-APOE-gen, DNA-APOE2, Apolipoprotein E

• Mistanke om type III hyperlipoproteinemi.
  (Særlig typisk hvis total-kolesterol og triglyceridene i serum er økt til omtrent samme tallverdi i mmol/L.)
• Videre utredning av allerede klinisk påvist demenssykdom

APOE-typing kan være ett av flere hjelpemidler til å skille ulike typer demens fra hverandre. Det er en forutsetning at demensdiagnosen allerede er stilt hos den enkelte pasient ved hjelp av klinisk og nevropsykologisk diagnostikk.

APOE-typing er ikke et egnet hjelpemiddel for å stille diagnosen demens og kan ikke og skal ikke benyttes til dette!

APOE-typing skal heller ikke benyttes prediktivt i den hensikt å prøve å anslå risiko for fremtidig utvikling av demens av Alzheimers type.

Bestilles fortrinnsvis elektronisk.

Ved behov for papirrekvisisjon, se Bestilling av analyser og rekvisisjoner (Medisinsk biokjemi) (Laboratorietjenester (OUS)) 

Ta kontakt med laboratoriet ved behov for å etterrekvirere analyser på allerede innsendt prøvemateriale. Etterrekvirering er avhengig av analysens holdbarhet og oppbevaringstid på laboratoriet.

Materiale: EDTA-fullblod (EDTA-rør).

Pasientforberedelse

Ingen

Prøvetaking

• Minste prøvevolum: 0,5 mL (helst 1 mL) fullblod.

Se eventuelt generell informasjon om Blodprøvetaking og Oversikt over prøvevolum i standard prøvetakingsrør

Oppbevaring

Prøven er holdbar flere døgn i romtemperatur, men oppbevaring i kjøleskap anbefales. Ved lengre tids lagring ( >1 mnd) bør prøven fryses.

Forsendelse

For OUS-interne rekvirenter: se Levering av prøver – Medisinsk biokjemi OUS

For eksterne rekvirenter:

Ordinær post, kan sendes ved romtemperatur. Se Prøveforsendelse

Avdeling for medisinsk biokjemi, Rikshospitalet.

Vanligvis innen 2 uker, ta kontakt dersom det haster mer.

Rikshospitalet

Sanntids PCR med alleldeteksjon vha. hybridiseringsprober og smeltekurveanalyse på LightCycler® 480 (Roche) instrument.

Analysen omfatter undersøkelse av følgende APOE-genvarianter (alleler):

• APOE2: NM_000041.3: c.526C>T; NP_000032.1: p.R176C
  (Varianten er tidligere kjent som Arg158Cys)
• APOE4: NM_000041.3: c.388T>C; NP_000032.1: p.C130R
  (Varianten er tidligere kjent som Cys112Arg)

Apolipoprotein E (ApoE) er et glykoprotein som spiller en viktig rolle i lipidhomeostasen både i blodsirkulasjonen og i hjernen. I plasma er ApoE assosiert med kylomikronrester, VLDL og noen subpopulasjoner av HDL. Lipoprotein bundet til ApoE tjener som ligand for LDL-reseptoren og andre reseptorer.

ApoE forekommer i tre vanlige varianter: ApoE3 (Cys130; Arg176), ApoE2 (Arg176Cys) og ApoE4 (Cys130Arg). (Opprinnelig litteratur angav aminosyreposisjonene 112 og 158 i stedet for 130 og 176)

ApoE2 er assosiert med type III hyperlipoproteinemi. I sammenligning med de andre to isoformene har ApoE2 mindre enn 1% av bindingskapasiteten til den hepatiske LDL-reseptoren. Dette kan føre til høye nivåer av P-kolesterol og P-triglycerider og dermed tidlig arterosklerose. Homozygositet for ApoE2 forekommer hos ca. 1% av kaukasisk befolkning, mens frekvensen av type III hyperlipoproteinemi kun er 1-7 per 5000. Bare et fåtall av personer som er homozygote for ApoE2/E2 vil dermed utvikle type III hyperlipoproteinemi. Andre genetiske faktorer og miljøfaktorer er også avgjørende.

APOE4 er assosiert med demens av Alzheimers type. Mens omtrent 25% av kaukasiske befolkninger er bærere av APOE4, er forekomsten om lag 60-70 % hos Alzheimer-pasienter. Men det er viktig å være klar over at verken ett eller to APOE-alleler er tilstrekkelig eller nødvendig for å utvikle demens av Alzheimers type.

Svarrapportering

• APOE-genotype rapporteres enten kun basert på antallet APOE2-alleler som er til stede hvis indikasjonen er type III hyperlipoproteinemi
• Dersom problemstilingen er videre utredning av allerede påvist klinisk demenssykdom, rapporteres svaret basert på resultatet av både APOE2- og APOE4-analysen.

Svartolkning

Homozygositet for genotype ApoE2 bekrefter diagnosen type III hyperlipoproteinemi i tilfeller der mistanken er sterk basert på verdiene av blodlipider. Fravær av homozygositet for APOE2 svekker diagnosen type III hyperlipoproteinemi i betydelig grad.

Homozygositet og i mindre grad heterozygositet for APOE4 styrker i noen grad mistanken om at klinisk påvist, sent debuterende demens kan være av Alzheimers type, men er på ingen måte diagnostisk for dette.

Usikkerhet

Hvis pasienten er stamcelletransplantert

• Genotype i fullblod kan være forskjellig fra genotypen i kroppen for øvrig.

Hvis pasienten er organtransplantert

• Genotype i fullblod kan være forskjellig fra genotypen til de(t) transplanterte organet/ene (f. eks. lever).

Blodtransfusjon

• Kan i sjeldne tilfeller påvirke genanalyseresultatet dersom antall leukocytter som overføres under transfusjonen er betydelig i forhold til pasientens leukocyttantall. Kan evt. sjekke dette ved å analysere blodprøve tatt ved et annet tidspunkt eller analysere genotype basert på annet cellemateriale.

Pasientens genotype er i utgangspunktet stabil og uendret gjennom hele livet. Det er således normalt ikke indisert å gjenta en genotyping hvis den er utført tidligere og svaret er tilgjengelig for rapportering.

Unntak kan være:

• Ønske om ny genotyping med en mer omfattende metode:
  Hvis man tidligere bare har fått undersøkt én eller noen få DNA-sekvensvarianter i det aktuelle genet, kan det være aktuelt å teste påny med en ny eller mer omfattende metode som fanger opp flere varianter.
• Pasienten er transplantert:
  Stamcelletransplantasjon tilfører donorleukocytter, noe som vil gi endret genotype ved analysering av blodprøve. Organtransplantasjon tilfører organ med donors genotype. Blodceller og øvrige vev er da uendret.
• Mistanke om feil:
  Selv om det er sjelden, kan det forekomme berettiget mistanke om feil genotyperesultat. I så fall kan ny genotyping være indisert. I tillegg til prøveforbytning eller feil knyttet til analysering eller rapportering, kan det ved leukopeni i forbindelse med graviditet eller hos personer som får ordinær blodoverføring (én enhet SAG-blod kan inneholde inntil 1 million leukocytter) forekomme at det i en periode på inntil noen måneder blir en tilblanding og proliferasjon av fosters eller blodgivers leukocytter (mikrokimerisme) som kan gi endret genotyperesultat.
• Klonal ekspansjon av mutert cellelinje hos pasienten

Ikke relevant.

APOE2 (rs7412): Allelfrekvensen er 0,05-0,10 i kaukasiske befolkninger, og stort sett på samme i nivå også i andre befolkninger

APOE4 (rs429358): Allelfrekvensen er 0,10-0,15 i kaukasiske befolkninger, stort sett lavere i andre befolkningsgrupper)