Spektrofotometri av spinalvæske (Xantokromi)

Spektrofotometri av spinalvæske er indisert i de tilfellene subaraknoidalblødning (SAH) eller annen intrakraniell blødning til spinalvæsken er mistenkt uten at blødning er påvist ved CT. Det er svært viktig ikke å overse en liten blødning, fordi den i 10-40% av tilfellene etterfølges av en kraftigere SAH med betydelig risiko for alvorlig varig skade eller død.

Feil tidspunkt for prøvetaking eller feilbehandling av spinalvæsken vil medføre høy risiko for falskt negativt resultat.
Korrekt prøvebehandling er svært viktig for korrekt analyseresultat.

Les derfor dette punktet NØYE før prøvetaking.

REKVIRENTENS OPPGAVER:
Prøvetaking

• Spinalpunksjon bør skje tidligst 12 timer etter symptomdebut. Hvis mulig, ta fire prøver av spinalvæsken. Prøven til spektrofotometri må alltid være den siste fraksjon av tappet spinalvæske fordi det da er mindre tilblanding med erytrocytter fra en eventuell innstikksblødning:
• Prøve nr. 1: Minimum 0,5 mL spinalvæske for bestemmelse av SP-proteinkonsentrasjon. Sendes til Avdeling for medisinsk biokjemi.
• Prøve nr. 2 og 3: Sendes til Avd. for mikrobiologi.
• Prøve nr. 4: Minimum 1 mL spinalvæske til SP-spektrofotometri. Prøven må beskyttes mot lys (f.eks. med aluminiumsfolie eller i en tykk, brun konvolutt).
• Lysbeskyttet prøve sendes umiddelbart til laboratoriet for sentrifugering som må skje innen 1 t etter spinalpunksjonen (helst innen ½ t).

Utfylling av rekvisisjon

• Fyll ut papirrekvisisjon til Avdeling for medisinsk biokjemi (MBK); (IR2448).
  Se Rekvisisjoner - Oslo universitetssykehus (oslo-universitetssykehus.no)
• Eksterne rekvirenter kan benytte FREK-rekvisisjon, Medisinsk biokjemi og farmakologi)
• Kryss av i en tom avkrysningsboks og før på ”SP-Spektrofotometri”
• Skriv i merknadsfeltet: ”Mistanke om …. (SAH/annen blødning)
• Før på tidspunkt for symptomdebut .(dato/kl.slett)."
• Før på tidspunktet for prøvetakingen/spinalpunksjonen (varighet fra symptomdebut til prøvetaking er essensiell informasjon)
• Om mulig tas en vanlig blodprøve for bestemmelse av P-bilirubin og P-totalprotein. (Dette må ikke forsinke prøveforsendelsen)

Prøvetransport

• Leveres umiddelbart til laboratoriet. Lysbeskyttelse er viktig. Rørpost bør unngås

OPPGAVER VED LOKALT LABORATORIUM

• Spinalvæsken sentrifugeres straks etter mottak
• Noter tidspunkt for sentrifugering på rekvisisjonen
• Noter utseendet på spinalvæsken før og etter sentrifugering
• Supernatanten avpipetteres og oppbevares mørkt og kjølig
• Sendes lysbeskyttet til MBK på OUS-Rikshospitalet

Holdbarhet

• Holdbar inntil 4 døgn hvis oppbevart mørkt og kjølig, men analysering så raskt som mulig bør tilstrebes

Bilirubin < 0,007 AU ("Korrigert bilirubinabsorbans")

Oksyhemoglobin < 0,020 AU

Avdeling for medisinsk biokjemi, Seksjon for medfødte metabolske sykdommer, Rikshospitalet.

Analysen krever bioingeniør med spesialkompetanse. Prøver tatt på vakt vil derfor bli analysert først neste ordinære arbeidsdag.

Analytisk og biologisk variasjon er ikke godt definert/bestemt. Både nivået av oksyhemoglobin og bilirubin er definert av absorbansen ved bestemte bølgelengder. Det er også andre stoffer/bestanddeler som kan påvirke absorbansen ved de aktuelle bølgelengdene. Nivået av protein i spinalvæsken, samt bilirubin i blodet som kan lekke over i spinalvæsken, vil påvirke absorbansen. Tid fra blødning fant sted til tidspunktet prøven ble tatt vil i vesentlig grad påvirke resultatet. Oksyhemoglobin stiger raskt (fra minutter/få timer) og faller raskt (få dager). Bilirubin stiger langsommere (fra noen få timer) og faller langsomt (uker).

Basert på studier og erfaringer fra store laboratoriesentra er det laget internasjonale konsensus-anbefalinger som angir en grenseverdi for korrigert bilirubinabsorbans på 0,007 absorbansenheter (AU). Sannsynligheten for at det har forekommet en subaraknoidalblødning er (svært) lav ved bilirubinabsorbans < 0,007 AU (ved 476 nm) forutsatt korrekt prøvetaking (minst 12 timer etter symptomdebut) og prøvebehandling (lysbeskyttet).

I tidsrommet ½ - 12 timer etter en intrakraniell blødning vil erytrocyttene begynne å lysere og frigi oksyhemoglobin til spinalvæsken. Dette påvises som en skarp absorpsjonstopp rundt 415 nm ved spektrofotometri av spinalvæsken. Maksimalverdien sees 1-2 døgn etter gjennomgått blødning, men toppen forsvinner i løpet av dager (under en uke). Etter 9-15 timer kan man også begynne å påvise tilstedeværelse av bilirubin som en bred topp rundt 455 nm eller som en ”skulder” til en eventuell oksyhemoglobintopp. Ved å analysere absorbansen ved 476 nm for å bestemme bilirubin, unngår man at absorbansen fra evt. tilstedeværende oksyhemoglobin medbestemmes. Bilirubinet dannes in vivo ved at hemoglobinet blir nedbrutt av hemoksygenase i makrofager og celler i hjernehinnene. Dette er årsaken til at man må vente minst 12 timer fra symptomdebut til prøvetaking for å kunne påvise bilirubin som tegn på blødning. Bilirubinnivået når maksimum om lag 2-3 døgn etter blødningen og er ofte påviselig i 2-3 uker.

Beregnet bilirubinabsorbans er beste mål på sannsynlighet for gjennomgått intrakraniell blødning. "Beregnet" vil si at det tas hensyn til bakgrunnsstøy ved absorbansmålingen, høye verdier av protein i spinalvæske og høye verdier av bilirubin i plasma som lekker over til spinalvæsken.

Beregnet bilirubinabsorbans > 0,007 AU (ved 476 nm) er forenelig med gjennomgått intrakraniell blødning. Med mindre det er sterke holdepunkter mot at det kan foreligge en gjennomgått intrakraniell blødning, bør alle disse pasientene behandles som om det er subaraknoidalblødning, siden risikoen for en blødning med katastrofale konsekvenser er betydelig.

Beregnet bilirubinabsorbans ≤ 0,007 AU taler mot gjennomgått intrakraniell blødning (gitt at det har gått >12 timer mellom symptomdebut og prøvetaking, og prøven har vært lysbeskyttet). Lav oksyhemoglobinabsorbans taler mot en subaraknoidalblødning de siste døgn forut for spinalpunksjonen (med mindre blødningen har funnet sted de aller siste timene før spinalpunksjonen)

VIKTIG: Se også "Informasjonsskriv til rekvirenter" for mer utdypende informasjon.

Spektrofotometrisk måling av spinalvæsken i bølgelengdeområdet 360 – 600 nm. Absorpsjonen måles i AU (Absorbance Units; absorbansenheter).

• Bilirubin kvantiteres ved 476 nm
• Oksyhemoglobin måles 415 nm

Informasjonsskriv til rekvirenter