Metodebok

Diagnostikk: identifisering av fremkallende allergenkilde ("culprit allergen source") dvs. svare på spørsmålet: "Var det bi- eller vepsegift som utløste den allergiske reaksjonen?" Diagnostikk må utføres før evt. oppstart av AIT (allergenspesifikk immunterapi). AIT demper reaktivitetene sterkt.
Monitorering av immunologisk effekt av AIT med terapeutisk vaksine basert på bi- og/eller vepseekstrakt. For detaljer se avsnittet "tolkning".

Prøvemateriale

Minimum 2 mL EDTA blod.

Undersøkelsesprinsipp

Prinsipp

Flowcytometrisk bestemmelse av uttrykk av CD63⁺ degranulasjonsmarkør etter stimulering med allergen.

Stimulering utføres med 4 konsentrasjoner av allergenekstrakt (bie, veps eller begge):

c1: 284.0 ng/mL; c2: 57.0 ng/mL; c3: 11.0 ng/mL; c4: 2.30 ng/mL

Hver konsentrasjon utløser en viss cellereaktivitet. Reaktiviteten defineres som andelen av basofile som er aktiverte (CD63⁺) og oppgis i %. På bakgrunn av de 4 målte reaktivitetsverdiene beregnes effektiv konsentrasjon EC₅₀. Denne defineres som allergenkonsentrasjonen som utløser halvmaksimal (50 %) reaktivitet og gis ut som ng/mL.

Avledet variabel av EC₅₀ er CDsens som regnes ut etter formelen: CDsens = 100/EC₅₀, og gis ut i mL/ng, dvs. mL serum per ng allergen.
Jo høyere CDsens verdi, jo høyere er sensitiviteten mot allergenet.

Testleverandør

FlowCast^® Bühlmann AG, Sveits

Referanseområde

Referanseområder for BAT med bi- og vepseekstrakt (diagnostikk)

Reaktivitet i alle konsentrasjoner < 10 %: negativ. EC₅₀ og CDsens utregnes ikke.
Reaktivitet >10 % i det minste i én av konsentrasjonene: positivt resultat. EC₅₀ og CD_sens utregnes.
Reaktiviteten kan teoretisk ligge mellom 0-100 %, men i praksis er det kun høyst 95 % av alle basofile som kan aktiveres.

Referanseområder for EC₅₀ og CDsens for bigift og vepsegift kan avleses fra tabellen
Trinn	I	II	III	IV	V
Tolkning	svært lav basofil sensitivitet	lav basofil sensitivitet	moderat basofil sensitivitet	høy basofil sensitivitet	svært høy basofil sensitivitet
EC₅₀ ng/mL	> 284	284 - 57	56,9 - 11	10,9 - 2,3	< 2,3
CD_sens mL/ng	< 0,35	0,35 - 1,75	1,75 - 9,1	9,1 - 43,5	> 43,5

Den allergenutløste reaktiviteten /sensitiviteten som måles med BAT korrellerer ikke direkte med alvorlighetsgraden av en ev. allergisk reaksjon. BAT har derfor liten prediktiv verdi for risiko for allergisk/anafylaktisk reaksjon og dens alvorlighetsgrad.

Forventet svartid

4 dager.

Svartid kan avvike pga ferie/redusert bemanning.

Tolkning

1. LEDD I DIAGNOSTIKK AV INSEKTGIFTALLERGI

For å bestemme pasientens sensitivitet mot bigift og vepsegift testes sensitivitet i BAT mot begge allergenekstrakter (bigift, vepsegift). Dersom begge resultatene slår ut positivt, beregnes bie/veps ratio etter formelen:

Ratio: CDsens veps/CDsens bie

Eksempel: CDsens veps = 0,5 mL/ng; CDsens bie = 10 mL/ng. Forholdstallet er lik 0,05. Signifikant høyere sensitivitet mot bigift.

Tolkningen finnes i tabellen under. (1)

Ratio CDsens veps / CDsens bie	Tolkning
>10	Signifikant høyere sensitivitet mot vepsegift enn mot bigift. Dersom klinikken tilsier det, kan AIT med vepsegift vurderes.
0,1 - 10	Pasienten er reaktiv både mot bi- og vepsegift. Dersom klinikken tilsier det, kan AIT med begge allergenekstrakter vurderes.
< 0,1	Signifikant høyere sensitivitet mot bigift enn mot vepsegift. Dersom klinikken tilsier det, kan AIT med bigift vurderes.

2. MONITORERING AV IMMUNOLOGISK RESPONS UNDER AIT MED INSEKTGIFTVAKSINE

For å måle pasientens immunologiske respons på vaksinen, utføres BAT kun mot ekstraktet fra allergenkilden pasienten er under behandling med (bigift eller vepsegift). Den allergenspesifike sensitiviteten uttrykt som CDsens er forventet å synke i løpet av AIT.

Det måles CDsens-utgangsverdi (før oppstart av behandlingen) og CDsens-aktuell verdi ved kontroll. Prosentverdi regnes ut etter formelen:

Prosentverdi av utgangsverdien (%): CDsens bie aktuell verdi x100 / CDsens bie utgangsverdi

(tilsvarende gjelder for vepsegift)

Eksempel: CDsens bie aktuell = 0,3 mL/ng; CDsens bie utgang = 30 mL/ng. Prosentverdien er lik 1 %, sensitiviteten falt til 1 % av utgangsverdien. Signifikant immunrespons mot allergenkilden pasienten blir vaksinert mot.

Ifølge testleverandørens data forventes prosentverdi av utgangsverdien falle i løpet av AIT ned mot 10 % (2,3).

Vår erfaring tilsier at dette kan være vanskelig å nå, især når CDsens-utgangsverdien kun er moderat, dvs. ligger mellom 1,8 - 9,1 mL/ng. Derimot, når CDsens-utgangsverdien er svært høy eller høy, faller sensitivitenen i løpet av AIT som regel raskt ned til moderate til og med lave verdier (observasjon i vårt laboratorium, upublisert).

Avgjørelsen om varigheten av AIT kan pr. d.d. ikke baseres på CDsens verdiene alene fordi dette enda ikke er dokumentert i kliniske studier og foreløpig ikke anbefalt i konsensusdokumenter.

Svarkode

Kortkode	Kode	Kodedefinisjon
B-BAT i1	NPU58094	Basocs(B)—Bee venom activated basophilocyte; num.fr.(i1; proc.) = ?
B-BAT i3	NPU58115	Basocs(B)—Wasp venom activated basophilocyte; num.fr.(i3; proc.) = ?

Les mer om Svarkoder.

Referanser

Eberlein B, Krischan L, Darsow U, Ollert M, Ring J. Double positivity to bee and wasp venom: Improved diagnostic procedure by recombinant allergen-based IgE testing and basophil activation test including data about cross-reactive carbohydrate determinants. J Allergy Clin Immunol. 2012;130(1):155-61.
Korosec P, Kosnik M. Predicting side-effects in venom immunotherapy by basophil activation: basophil sensitivity vs maximal response. Allergy. 2007;62(1):81.
Patil SU, Shreffler WG. Immunology in the Clinic Review Series; focus on allergies: basophils as biomarkers for assessing immune modulation. Clin Exp Immunol. 2012;167(1):59-66.

Viktig informasjon

Spesialanalyse, utføres kun etter avtale, telefonnummer 22 11 88 90.

Analysen bes varslet minst 2 uker på forhånd da testallergener må bestilles.

Om analysen

Basofil aktiveringstest (BAT) måler graden av aktivering av basofile granulocytter etter eksponering for et allergen. De basofile granulocyttene kjenner igjen allergener ved hjelp av lgE som er bundet til lgE-reseptorer på cellene. Ved allergenbinding vil de basofile granulocyttene frigjøre innholdet i sine granulae (degranulere). Dette kan måles fordi de samtidig får et uttrykk av molekylet CD63 på sin overflate.

BAT må ikke forveksles med histaminfrigjøringstest (HRT). Testprinsippet likner og indikasjonene er de samme, men målevariablene er ulike. Ved HRT måler man histamin som frigjøres ved degranulasjon, mens ved BAT måler man degranulasjonsmarkører på cellene. De to metodene har ulik tolkning og diagnostisk ytelse.

Rekvirering

Må avtales, se Viktig informasjon.

Lenke til rekvisisjon.

Prøvetaking og prøvebehandling

Glasset må være minst halvfullt, dvs. minst 2 mL blod i et 4 mL EDTA-glass for at det ikke skal bli et misforhold mellom kalsium i blodprøven og EDTA i glasset. Ved for mye EDTA i forhold til plasmaets kalsium, kan resultatene bli falsk negative.

Prøven må være merket med dato og klokkeslett.

Informasjon Prøvetaking BAT.pdf