Etablering av MRD-analyser for B- eller T-ALL, evt. MPAL er omfattende og tidkrevende. Det er viktig at laboratoriet kontaktes dersom diagnose endres og det ikke er behov for analyse.

ASO-qPCR analyse etableres for behandling i følgende protokoller:

• ALLTogether (A2G)
• T-ALL, NOPHO-2008
• B-ALL, NOPHO-2008 dersom behov for støtteanalyser til flowcytometri
• EsPhALL2017
• Residiv behandlet i IntReALL
• Interfant-21. Markører for immunglobulin (IG) og T-celle reseptor (TR) genrearrangering etableres. KMT2A-MRD utføres ved Clinical Immunology, Rigshospitalet, København. Det er viktig å informere laboratoriet når pasient inkluderes. Dersom DNA skal videresendes må rekvisisjons fylles ut Referral form_MRD analysis_KMT2A.docx.
• Ved annen indikasjon må patolog kontaktes

• Benytt: Rekvisisjon Molekylær Hematopatologi

Fyll ut nødvendige kliniske opplysninger og planlagt behandlingsprotokoll, kontakt laboratoriet dersom endringer. For eksterne rekvirenter ring laboratoriet for opplysning om andel blaster i i tilsendt materiale.

Benmargsaspirat på EDTA og EDTA-blod

Arkivert prøvemateriale:

• Cellepellet, minimum 5x10⁶ celler eller
• DNA minimum 5000 ng

Diagnostisk materiale benyttes både for etablering av ASO-qPCR analyser og som kalibrator for oppfølgingsprøver. Andel blaster må telles i samme materiale/aspirat:

• Benmargsaspirat fordeles mellom molekylærpatologi og flow, se eventuelt veileder.
  • 1,5 ml av benmargsaspirat nr. 1, til molekylær hematopatologi (PCR)
  • 4,5 ml av benmargsaspirat nr. 2, til ASO-qPCR
  • Ved dry-tap, se veileder
• Blod 3-5 ml. Husk også sende blod til flowlab for telling av andel blaster

Ved OUS er det for A2G-protokoll laget veiledere for prøvetakning, se Prøvetakning og forsendelse A2G retningslinjer Voksen_OUS.pdf eller Prøvetakning og forsendelse A2G_retningslinjer Barn_OUS.pdf

Materiale må ikke utsettes for frost. Dersom det i tillegg skal utføres screening av fusjonstranskript/genuttrykk må prøven ankomme innen 24 timer, senest kl.13.30 fredag eller dag før helligdag.

Molekylær hematopatologi, generell informasjon (Oppbevaring og forsendelse)

• Enhet for molekylær hematopatologi, OUS Radiumhospitalet

Etablering av ASO-qPCR tar mellom 14-28 dager. Det er først ved analysering av første oppfølgingsprøve at man får endelig svar på om etablering lyktes.

Unike klonale immunglobulin og T-celle reseptor genrearrangeringer identifiseres. I tillegg screenes det for STIL::TAL1 translokasjon eller IKZF1 mikrodelesjon. Til dette benyttes både fragmentanalyse, sangersekvensering og/eller dypsekvensering (HTS).

Det vil designes Allel Spesifikke Oligonukleotid-primere (ASO) rettet mot den enkelte pasients unike rearrangeringer til bruk for kvantitering av målbar restsykdom med qPCR.

Det angis i prøvesvaret om markør(er) er etablert.

• Beskrivelse av den unike rearrangeringen for valgte markører (gen, lokus og beskrivelse av junction)
• Hvis mulig etableres to markører
• I A2G protokoll kan bruk av kun 1 markør oppfylle krav
• I noen tilfeller kan det være behov å følge pasient med mer enn to markører

• Nedre kvantiterbare område på en MRD analyse bør minimum være 1x10^-4 (0,01%), unntak vil være beskrevet i protokoll
• I noen tilfeller lykkes man ikke med å etablere markør, da må pasienten følges med flow

• Kreft hos barn handlingsprogram
• Maligne-blodsykdommer--handlingsprogram/akutt-lymfoblastisk-leukemi-all-og-lymfoblastlymfom-hos-voksne